PG电子的细胞培养指导手册

培养条件

细胞应在DMEM培养基中，添加10% FBS和1% P/S，以便贴壁生长。培养温度设定为37℃。

传代方法

首次建议1:2传代，传代后的液体在2天内应更换。建议同时购买相关培养工具，享受优惠价格。收到细胞后，进行相关处理，培养至良好的状态后，应在瓶内灌满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞在运输过程中的安全。

操作步骤

细胞观察与记录

在收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以使细胞适应环境后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数下的细胞照片，建议拍摄40x、100x、200x每种倍数各一张，前三天的观察照片是重要的售后依据，若无照片提供，则默认收到的细胞状态良好。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管，留5ml继续培养于37℃、5% CO2环境；若细胞密度超过80%，则可进行传代。

贴壁细胞传代步骤如下：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS轻轻润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞状态。若细胞已大部分变圆并脱落，迅速取出，轻轻敲打培养瓶后加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全从瓶壁脱落并吸出，悬液转移至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 悬浮细胞传代步骤

1. 进行半换液处理，将培养瓶竖着静置1小时，轻轻吸走3ml培养基，再补充3ml的完全培养基。
2. 如需分瓶，将细胞悬液收集于离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养液重悬，再按1:2的比例分瓶，保持细胞生长活力。

细胞冻存步骤

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察直至细胞变圆，接着加入5ml完全培养液结束消化，并轻轻吹打使其脱落，转移至离心管中以1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清后，加入1ml专用冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中；
4. 将冻存细胞存放于-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，需在-80℃下保存24小时以上。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出冻存管（注意防护），迅速置于37℃水浴中解冻，确保管内无结晶，然后用75%酒精消毒外壁；
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中；
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

注意事项

有些细胞在运输过程中可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如发现脱落细胞较多，应将培养瓶的培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟，将上清液作为过渡培养，再加入胰酶轻轻吹打重悬。此过程结束后再按1:2比例进行分瓶传代，确保有效补充完全培养基，最终放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

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